Морфология по крюгеру норма для естественной беременности

Морфология по крюгеру норма для естественной беременности thumbnail

Морфология сперматозоидов (их размер и форма) — это один из факторов, который изучается в рамках анализа спермы для оценки мужского бесплодия. Результаты исследования по Крюгеру представлены в виде процентного содержания сперматозоидов, которые выглядят нормальными, когда сперма просматривается под микроскопом.

Назначение и специфика исследования

Морфология означает долю сперматозоидов, имеющих нормальную форму. Не все мужские половые клетки одинаковы.

Аномалии размера и формы могут возникать в любой части сперматозоида:

  • голове;
  • средней части;
  • хвосте.

В некоторых случаях эти мутации или изменения не влияют на общую функциональность клеток. В других ситуациях сперматозоид может не двигаться должным образом или достаточно быстро, чтобы достичь и проникнуть в оболочку женской яйцеклетки.

Врачи оценивают морфологию сперматозоидов во время общего анализа спермы или теста на фертильность. Сама по себе аномальная или низкая оценка половых клеток обычно не является признаком бесплодия.

Иногда головки или хвосты мужской гаметы имеют ненормальный размер или соотношение сторон. Клеточное строение спермы обычно измеряется только в тех случаях, когда пара оценивает свои варианты экстракорпорального оплодотворения. Морфология коррелирует с шансами на успешное зачатие с помощью ЭКО.

Однако для обычного полового акта или искусственного оплодотворения параметр морфологии в основном не имеет значения.

Для чего нужен метод диагностики? Показания

Из миллионов сперматозоидов, попадающих во влагалище после секса, лишь 1/100 часть приближается к яйцеклетке. Даже эти немногие должны быть достаточно здоровыми, чтобы выжить в женском теле в течение продолжительного времени. При попытке зачать ребенка, чем больше здоровых сперматозоидов, тем больше шансов, что один из них доживет до яйцеклетки.

Анализ спермы измеряет ряд параметров, которые влияют на вероятность попадания мужских клеток в яйцеклетку. Некоторые из параметров являются индикаторами производства и здоровья сперматозоидов, другие относятся к качеству спермы и ее способности помогать мужским гаметам на пути к яйцеклетке.

Морфология по Крюгеру, норма которой стандартная для мужчин всех возрастов, – это «строгий» тест, проводимвый с парами, бесплодие которых имеет необъяснимый характер, даже если анализ спермы и нестрогая морфология в норме.

Когда у мужчины уменьшилось количество сперматозоидов нормальной формы по «строгому» морфологическому анализу Крюгера, то он подвергается риску неудачного оплодотворения или низкой скорости зачатия.

Показатели нормальной морфологии по Крюгеру

Просто наличие ненормальной спермы не повлияет на мужскую фертильность, есть и другие факторы. Сперматозоиды неправильной формы не означает, что генетический материал, который они несут, поврежден. Мужчины с аномальной морфологией клетки могут оплодотворить женщину.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы

Это означает, что он не бесплоден, но ему может потребоваться больше времени, чтобы женщина забеременела. Если естественное зачатие не произойдет, у него будет возможность воспользоваться вспомогательными репродуктивными технологиями, такими как ЭКО.

Наличие от 0 до 3% аномальных мужских гамет означает очень серьезное нарушение или невозможность оплодотворения. Однако наличие большого процента деформированных сперматозоидов не редкость. Только от 4% до 10% клеток в образце спермы являются нормальными, то есть подавляющее большинство сперматозоидов не выглядит идеально под микроскопом.

Наряду с морфологией сперматозоидов типичный анализ спермы также оценивает:

  • объем спермы;
  • общее количество сперматозоидов;
  • концентрацию спермы;
  • жизнеспособность клеток;
  • моторику мужских половых клеток.

Чтобы подпадать под категорию нормальной морфологии мужских половых клеток, они не должны содержать каких-либо дефектов, а иметь овальную головку с длинным хвостом.

  • Головка должна быть гладкой, с хорошо выраженной акросомной областью в апикальной части (верхней части). Если есть вакуоли, они не могут превышать 20% площади головы. Ширина головки от 2,5 до 3,5 и длина от 5 до 6 микрометров.
  • Кончик акросомы должен занимать от 40 до 70 % пространства головки сперматозоида.
  • Шея соединяется с головой своей осевой частью (напротив акросомы). Длина серединки должна быть в 1,5 раза больше головы.
  • Хвост должен быть длиной 45-50 мкм и тоньше остальной части сперматозоидов.
  • Общая длина сперматозоида должна составлять от 50 до 60 микрон.

Морфология по Крюгеру (норма описана в медицинских источниках) допускает количество сперматозоидов от 4 до 14%. Этого достаточно, чтобы мужчина был фертильным.

Подготовка к анализу

Перед тем как сделать спермограмму, мужчина должен воздержаться от эякуляции в течение 2, но не более 7 дней. Не следует в течение этого же времени употреблять спиртные напитки, планировать походы в сауну и баню.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы Не рекомендовано проходить физиопроцедуры, обследования с использованием аппаратуры, в том числе рентгенологические.

Как правильно сдавать анализ

За сутки до сдачи эякулята следует воздержаться от физических перегрузок, стрессовых ситуаций. Непосредственно перед сдачей анализа следует освободить мочевой пузырь.

При сборе спермы нельзя применять различные смазочные материалы, в том числе слюну, пользоваться презервативом. Перед началом мастурбации пациент должен тщательно вымыть руки, половой орган. Следует проследить, чтобы эякулят был собран до последней капли.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы

Если сбор материала происходит в клинике, то перед анализом пациенту выдают стерильный контейнер. Для сбора в домашних условиях, контейнер получают в регистратуре, но содержимое необходимо сдать для анализа не позднее 30 мин после сбора. Температура содержимого не должна быть ниже температуры тела. Его нельзя охлаждать и встряхивать.

Оценочные критерии

При оценке морфологии учитывается несколько аспектов формы сперматозоидов, включая головку, среднюю часть, хвост и наличие цитоплазматических капель. Аномальная морфология сперматозоидов называется тератоспермией. Используя современные рекомендации, лаборатория оценит 200 сперматозоидов в образце и определит, какой процент из них имеет нормальную форму.

Читайте также:  Базальная температура на 22 день цикла при беременности

Показания морфологии очень субъективны и зависят от подготовки и опыта человека, выполняющего оценку. Существует несколько типов определяющих принципов для выявления результатов, и в отчете указывается, какой из критериев используется.

Два наиболее часто используемых — это ВОЗ (III издание) и «строгий» тест Крюгера. А также можно увидеть ссылку на V издание руководящих принципов ВОЗ, которые совпадают с критериями Крюгера.

Морфология по Крюгеру, норма которой определяется стандартами ВОЗ, наиболее клинически полезный критерий. Она основывается на оценке сперматозоидов, которые успешно мигрировали в шейку матки после естественного полового акта. Первоначальные нормы 1986 г. использовали цифру 14% или более в качестве порогового значения для «нормальной» морфологии.

Однако строгость определяющих принципов с годами изменилась. Критерии основывались на внешнем виде сперматозоидов, которые успешно переместились в верхний эндоцервикальный канал после естественного полового акта, с предположением, что эти сперматозоиды обладают превосходной функциональной способностью.

«Строгая» морфология Крюгера считается ненормальной при оценке от 0 до 3%, что означает очень серьезное нарушение или невозможность оплодотворения.

Акросома

Акросома — это уникальная мембранная органелла, расположенная над передней частью ядра сперматозоида и содержащая ферменты, которые помогают проникать через мембрану яйцеклетки. Эту часть называют колпачком, закрывающим головку сперматозоида.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы

Верхушечная часть головки облегчает акросомную реакцию, которая возникает, когда яйцеклетка и сперматозоид сливаются вместе, что приводит к оплодотворению. Аномальные акросомы препятствуют оплодотворению и вызывают бесплодие по мужскому фактору.

Верхушечная часть важна на самых ранних стадиях оплодотворения, в фазе, известной как акросомальная реакция. Во время естественного зачатия сперма проходит через репродуктивную систему женщины в поисках яйцеклетки. Как только яйцеклетка обнаружена, сперматозоид пытается оплодотворить.

На этом этапе яйцо покрывается толстым слоем мембраны, называемым пеллюцидной зоной. Акросома высвобождает пищеварительный фермент акрозин, который растворяет блестящую оболочку, позволяя сперматозоиду проникать через мембрану яйца. Затем головка сперматозоида сливается с яйцеклеткой, и происходит оплодотворение.

Головные дефекты:

  • большие, маленькие, конические (удлиненные), грушевидные круглые и аморфные (суженные) головки;
  • вакуолизированные, головки с малой площадью шляпки (<40% площади головы);
  • двойные головки.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы

Когда акросома отсутствует, сперматозоид обычно имеет сферическую форму, которая на окрашенном мазке выглядит круглой. Когда большая часть или все сперматозоиды круглые, без акросом, это редкое клиническое состояние, называемое глобозооспермией хромосомы.

Хвост

По Крюгеру нормальные сперматозоиды имеют овальную головку с длинным хвостом. Хвост спермы может иметь несколько дефектов, и в этом случае движение является основным параметром. Среди различных типов деформаций наиболее распространенными являются слишком короткий хвост, двойной, несколько хвостов, спиральный и хвост неправильной толщины.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы

Аномалии такого рода как изогнутый или двойной хвост влияют на способность сперматозоидов проникать в яйцеклетку. Дефекты хвоста вызывают заболевание сперматозоидов, известное как астенотератозооспермия, при котором страдают морфология и подвижность.

Большинство этих аномалий не препятствуют достижению сперматозоидами яйцеклетки и их оплодотворению, что приводит к жизнеспособному эмбриону.

Шейка и тело

Дефекты промежуточной части включают в себя:

  • изогнутую шею (шея и хвост образуют угол, превышающий 90 ° по сравнению с продольной осью головы);
  • асимметричное вставление шеи в голову;
  • неправильную форму средней части;
  • аномально тонкую или толстую среднюю часть;
  • цитоплазматическую каплю;
  • комбинацию из предыдущих вариантов.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы

Кроме того, отсутствие митохондрий в средней части тела считается еще одним типом аномалии. Митохондрии отвечают за обеспечение сперматозоида необходимой энергией для движения вперед и назад.

Расшифровка ответов анализа, оценка по параметрам Крюгера

Требования к нормально сформированной сперме включают:

  • голову овальной формы с гладкой каймой;
  • головку шириной от 2,5 до 3,5 микрометров (мкм) и длиной от 5 до 6 мкм;
  • кончик акросомы (мембрана с ферментами, способными проникать в мембрану яйца), покрывающий от 40 до 70 процентов головки сперматозоида;
  • голову без больших вакуолей (органелл, заполненных жидкостью) и не более 2 маленьких вакуолей, которые занимают менее 20 процентов общей головы;
  • среднюю часть сперматозоида (сегмент между головкой и хвостом) примерно такой же длины, что и головка, но намного тоньше;
  • развернутый хвост длиной 45 мкм, который должен быть тоньше головки и средней части сперматозоида;
  • отсутствие дефектов головы, хвоста.

Пример написания положительных результатов:

ПараметрыНорма оценки
Объём спермы1,5 мл или более
Морфология сперматозоидов (строгие критерии ВОЗ): норма14% и более
Сниженный показатель, но зачатие вероятно4-14%
Патологии, зачатие невозможно
Аномалии головки 0-3%
Аномалии шейки
Аномалии хвоста

Остатки цитоплазматических капель (образующихся при производстве спермы) будут считаться ненормальными, если их размер превышает ½ размера головки сперматозоида.

Причины отклонений показателей от нормы

Деформированные или дисфункциональные мужские половые клетки препятствуют проникновению в женскую яйцеклетку, поскольку они могут не выделять соответствующие ферменты, необходимые для разрушения блестящей оболочки.

Это может быть вызвано:

  • генетическими условиями;
  • нарушением здоровья, влияющим на качество спермы;
  • образом жизни, ухудшающим качество спермы, например, стресс, курение, употребление наркотиков или чрезмерное употребление алкоголя.

Что может повлиять на достоверность исследования?

Морфология по Крюгеру (норма подсчёта в каждой клинике может немного различаться) бывает субъективной. Баллы могут отличаться для одного и того же образца спермы в одной лаборатории с использованием одинаковых методов подсчета.Морфология по Крюгеру. Норма, расшифровка спермограммы

Читайте также:  Беременность 2 недели тест не показывает беременность

Большинство экспертов по мужской фертильности согласны с тем, что роль морфологии сперматозоидов в прогнозировании беременности неясна и что это плохой предиктор бесплодия, если только почти 100% сперматозоидов не являются аномальными.

На занижение показателей также могут повлиять:

  • прием определенных лекарственных средств;
  • хронические заболевания мочеполовой системы;
  • избыточный вес;
  • травмы, полученные в области паха, яичек;
  • занятия спортом;
  • неправильное питание или голодание, нехватка некоторых витаминов;
  • перегрев яичек за счёт тесного белья, сидячей работы;
  • поствоспалительные спайки, нарушающие семявыносящий проток.

Где сдавать анализ, цены

Большинство клинических лабораторий проводят приблизительную оценку процента сперматозоидов в образце эякуляции, которые имеют нормальную форму. Только в специализированных андрологических лабораториях есть обученные техники, которые могут выполнять «строгий» анализ спермы по Крюгеру.

В медицинских клиниках спермограмма Крюгера изучается врачами эмбриологами. Это позволяет определить не только морфологию мужских половых клеток, но и их перспективу по оплодотворению.

Спермограмму можно сделать в специализированных клиниках, диагностических, репродуктивных центрах, имеющихся в больших городах. Анализы проводят и некоторые лаборатории при научных центрах и медицинских институтах.

Средняя цена за услуги составляет от 1 тыс. 300 руб. Расширенная спермограмма стоит дороже, от 2 тыс. руб.

Более точный диагностический результат достигается при сдаче анализа расширенной спермограммы, поскольку в результатах важно понимать, что все параметры взаимосвязаны.

Например, у человека может быть низкая концентрация сперматозоидов (10 миллионов), но большой объем (6 мл), это даст общее количество сперматозоидов 60 миллионов, что находится в нормальном диапазоне. Также может быть большое количество, но низкая подвижность, или низкое количество, но высокая подвижность.

Анализ мужских половых клеток с помощью нормы морфологии по Крюгеру определяет не только влияние мужских половых клеток на фертильность, выявляет аномальный анализ спермы, но и способствует раннему диагностированию более серьезных заболеваний, таких как рак яичек.

Видео о морфологии по Крюгеру

Спермограмма по Крюгеру:

Источник

Обычная спермограмма дает оценку качества семенной плазмы (жидкости, в которой находятся половые клетки), позволяет определить концентрацию сперматозоидов и степень их подвижности, но не углубляется в структуру (морфологию). Спермограмма по Крюгеру (спермограмма с оценкой морфологии по строгим критериям Крюгера) – доскональное изучение строения сперматозоидов, в ходе которого лаборант-сперматолог сравнивает образцы в эякуляте с эталоном. Анализ обычно сдают для оценки шансов на естественное зачатие. Необходим он и для выбора оптимального варианта проведения ЭКО (ИКСИ, ПИКСИ или донорская сперма) и прогнозирования успешного исхода процедуры.

Особенности анализа

В эякуляте здорового мужчины находится огромное количество различных форм сперматозоидов (полиморфизм). Долгие годы ученые пытались их систематизировать, разделить на группы, отличить здоровых от дефектных. Делалось это для выявления зависимости между количеством определенных форм сперматозоидов и вероятностью естественного зачатия.

Точку в этом вопросе поставил профессор Крюгер (Dr. Thinus Kruger) совместно с Менквельдом (Menkveld) в 1986 г. Был произведен сравнительный анализ двух групп сперматозоидов: достигших в течение 8 часов после эякуляции внутреннего зева матки (преодолевших цервикальную слизь) и оставшихся на уровне внешнего зева. Их параметры существенно отличались, из чего был сделан вывод: морфологически нормальными являются сперматозоиды из первой группы. Чем их больше, тем фертильнее мужчина, тем выше вероятность естественного зачатия. Структура этих сперматозоидов была тщательно изучена и принята за стандарт, эталон. Это так называемые строгие тайгербергские критерии, по которым и производится оценка мужских половых клеток.

Критерии сперматозоидов по Крюгеру

Параметры фертильного сперматозоида (по Mortimer & Menkveld, 2001):

  1. Головка гладкая, овальная, с четкими контурами. Акросома (пузырек с ферментами в передней части головки) занимает от 40 до 70%. Сперматозоиды с аномалиями акросомы не способны проникнуть через оболочку яйцеклетки – она не растворится.
  2. Шейка тонкая, выраженная, по длине примерно с головку, находится с ней на одной оси, без перекрутов.
  3. Жгутик (хвост) тоньше шейки, одинакового диаметра почти по всей длине, которая должна быть примерно в 10 раз больше головки. Может закручиваться сам на себя. Главное, чтобы не было поломок, резких загибов под углом.

При оценке наиболее важным критерием является форма головки. Сперматозоид с аномальным строением данной части не только обладает сниженным оплодотворяющим потенциалом, но и несет опасность замершей беременности, выкидыша, патологий развития плода из-за повреждения ДНК.

Категории дефектов:

  • Головка: слишком большая или маленькая, конусообразная, круглая, раздвоенная, с невыраженной акросомой;
  • Шейка и средняя часть: гетероаксиальность (несимметричное присоединение), несоответствие толщины или длины;
  • Основная часть хвоста: слишком короткая, загнутая, с неправильным контуром;
  • Большая цитоплазматическая капля (остаток ткани после образования сперматозоида).

К особо опасным дефектам относятся ацефалические сперматозоиды (состоящие только из одного хвоста, головка теряется при формировании) и глобулозооспермия (мелкие круглые головки без акросомы).

Если параметры половой клетки отличаются от эталонных, она признается дефектной. При этом неважно, насколько значительны различия (поэтому критерии и называются строгими).

Как проводится анализ

Для проведения оценки морфологии по Крюгеру эякулят наносят на предметное стекло, высушивают, затем окрашивают и рассматривают под тысячекратным увеличением. Примеры применяемых красителей:

  • По Papanicolaou – уменьшает сперматозоиды;
  • Diff-Quik – увеличивает сперматозоиды;
  • Sperm Blue – размеры не изменяются.
Читайте также:  Препараты для снижения тонуса матки при беременности

Окрашивание позволяет разделить различные области сперматозоида: головка приобретает один цвет в области акросомы, другой в задней части головки, средняя часть (тело), хвост, слишком выраженная цитоплазматическая капля также имеют свои оттенки. Пример окрашенных сперматозоидов приведен ниже.

Окраска Sperm Blue

Существует специальное программное обеспечение (спермоанализатор), позволяющее подробно анализировать структуру окрашенных сперматозоидов. Большинство клиник использует «Аргус-CASA». Камера передает изображение с предметного стекла микроскопа на экран компьютера, а программа автоматически классифицирует сперматозоиды в поле зрения, подсчитывает количество дефектных, определяет характер дефектов, процентное отношение патологических форм к нормальным. Пример работы программы:

Компьютерный анализ морфологии (скрин экрана)Измерение размеров сперматозоидов

Для проведения расширенной спермограммы по Крюгеру рассматривают примерно 400 сперматозоидов. Сначала оценивают 200, потом еще 200, затем сравнивают результаты и выводят среднее значение. В ходе анализа рассчитывают количество сперматозоидов с дефектами шейки, хвоста, головки, с цитоплазматическими каплями. При ручной обработке подсчет производят при помощи лабораторного счетчика (делают разное количество щелчков кнопкой для каждого дефекта). В итоге вычисляют общий процент нормальных форм − индекс Крюгера (Kruger Fertility Index — KFI).

У многих лабораторий есть компьютерное оснащение для оценки строгой морфологии по Крюгеру, но это еще не является гарантом достоверного результата. Важна квалификация специалистов, которые должны уметь настраивать микроскоп, владеть методиками работы с красителями, правильно интерпретировать данные.

Расшифровка, вероятность зачатия

Авторами строгих критериев были предложены две пороговые точки: 14 и 5% (таблица 1). Если у мужчины менее 5% нормальных сперматозоидов, то его шансы на естественное оплодотворение крайне низки, прогноз неблагоприятный даже при ЭКО (Таблица 2). Единственным вариантом для таких пар остается ИКСИ – введение отобранного нормального сперматозоида непосредственно в яйцеклетку. Если нормальных форм 14% и выше, сперма считается фертильной.

Таблица 1. Пороговые точки фертильности спермы (по строгим критериям Крюгера)

Процент нормальных сперматозоидовПрогноз образцаКлассификация образца
>14%НормальныйФертильный
от 5 до 14%ХорошийСубфертильный/фертильный
от 0 до 4%ПлохойСубфертильный

Таблица 2. Средняя частота оплодотворения (по данным журнала «Проблемы репродукции» № 3 за 2002 г)

Нормальные сперматозоидыЧастота оплодотворения, %Частота беременности, %
≤4%59.315.2
>4%77.626
<14%72.724.3
≥14%83.625.2

По рекомендациям ВОЗ критерии не такие строгие. Нормой считается, если в сперме более 70% сперматозоидов без аномалий головки. При оценке по методу Крюгера даже у здоровых мужчин эякулят содержит не более 30% анатомически и функционально совершенных половых клеток.

Вы можете сами предварительно оценить результаты спермограммы с помощью онлайн-калькулятора (можно выбрать критерии ВОЗ или по Крюгеру):

Подробная статья о расшифровке спермограммы — таблицы значений, нормы ВОЗ, а также, что делать при плохих результатах анализа.

Подготовка, где сдавать, цены

Спермограмма с оценкой морфологии по Крюгеру считается расширенной, но в каждой лаборатории это понятие может подразумевать различный набор анализов (мар-тест на IgG и IgA, биохимия спермы, иммунологический фактор, фрагментация). При выборе услуги «расширенная спермограмма» лучше предварительно уточнить, какие виды исследований в нее входят.

Об особенностях проведения MAR-теста рассказывает эмбриолог Дубко Татьяна Владимировна

Подготовка к сдаче спермограммы по Крюгеру включает те же ограничения, что и для обычного анализа спермы (ознакомиться подробнее с условиями сдачи спермограммы).

Сдать спермограмму по Крюгеру можно практически в любом медцентре или независимой сетевой лаборатории. В «Инвитро» услуга обойдется в 1650 руб., в «Ситилаб» − 1500 руб., в клинике «ОсНова» (СПб) − 3360 руб., в сети клиник «МедСервисЦентр» (Москва) – 2000 руб.  Результат будет готов через день.

Отзывы

Даниил, 41 год: «В «Инвитро» и «Хеликс» сдавать спермограмму по Крюгеру не рекомендую – выброшенные деньги, нигде не принимают результаты, репродуктологи им не доверяют из-за слишком формального подхода к подсчету и оценке результатов. Лучше в госбольницах. В Питере можно доверять Мариинской, там грамотные специалисты».

Олег, 29 лет: «Слышал, что московские репродуктологи доверяют всего нескольким лабораториям: «ДНКом», МГНЦ РАМН (Москворечье) и еще какой-то третьей, не помню. Я сдавал в «ДНКоме», результаты были лучше по сравнению с репроклиникой «Альтравита» − 2% против 0,5».

Наталья, 42 года: «При проблемах с зачатием сразу сдавайте морфологию по Крюгеру. Для сперматозоидов важна не только способность быстро перемещаться и количество, многое зависит именно от их качества. Я несколько лет мучилась из-за невынашивания беременности, а проблема оказалась в плохой морфологии сперматозоидов мужа. Если бы сразу сдали анализ по Крюгеру, мне не пришлось бы терять здоровье и время».

Заключение

Спермограмма по Крюгеру – прогностически ценный, но сложный тип анализа. ВОЗ постоянно принимает меры для стандартизации методов исследования сперматозоидов, но различия сохраняются, а, соответственно, и вероятность ошибок на технических этапах. Результаты исследований в разных центрах могут различаться вплоть до 50%. Связано это с различными методами подготовки мазка спермы (фиксация, окрашивание), уровнем профессионализма лаборантов. Сдавать спермограмму по Крюгеру следует в лабораториях с жестким внутренним контролем качества (перепроверяют несколько раз, постоянно обновляют знания методик проведения анализа), желательно при государственных репродуктивных центрах.

Источники:

  1. https://www.dia-m.ru/lab/mikroskopiya-sistemy-videodokumentirovaniya/apparatno-programmnyy-kompleks-dlya-analiza-izobrazheniy-argus-casa/
  2. https://maximus2012.nethouse.ru/static/doc/0000/0000/0349/349989.hkxwiajjzo.pdf
  3. https://www.rusmedserv.com/problreprod/2002g/3/article_966.html

Источник